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등록/수정일15.03.17 / 15.03.17
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- 실험주제 : 배지 만들기 - LB Plate & LB Broth
- 실험날짜 : 2013. 9. 10. 화
1. Introduction
배지란 미생물을 배양하기 위해 그들이 필요로 하는 영양물질을 가진 것이다. LB plate(Agar 3g 넣은 것), LB plate(Agar 1.5g 넣은 것)와 LB broth를 만들어 봄으로써 재료 및 성분을 알아보고 그 작용원리를 이해해본다. 더불어 LB plate(Agar 3g 넣은 것)와 LB plate(Agar 1.5g 넣은 것)를 비교해본다.
3. 실험방법
① 깨끗한 삼각 플라스크를 준비 한다.
② 증류수 200ml을 넣는다.
③ Tryptone 2g, Yeast extract 1g, NaCl 1g을 저울로 재서 넣는다.
(LB plate를 만들 때는 Agar를 첨가해준다.)
④ 살짝 흔들어서 섞어준다.
⑤ 삼각 플라스크의 윗부분을 호일로 싸고 autoclave tape를 붙여준다.
⑥ Autoclave에 증류수를 바닥에 있는 열 코일이 잠길 정도로 넣어준다.
(만약 물이 없는 상태에서 멸균을 시작하게 되면 autoclave가 타버린다.)
⑦ 다음 멸균하고자 하는 배지를 기계에 넣어주고 작동시킨다.
(고온고압 멸균으로 121℃, 1.5기압에서 15분간 모든 균을 사멸시키는 과정)
⑧ 멸균이 끝나면 LB broth는 상온에서 식힌 후 사용한다. (4℃ 보관)
⑨ Agar를 첨가 해 준 것은 LB plate를 만들어 준다.
적당히 식은 배지를 petri dish에 부어준다. (약 10ml)
⑩ 상온에서 굳혀주면 LB plate가 완성, 만들어진 plate는 뒤집어서 4℃ 보관한다.
* 주의할 점
- Agar 배지는 기포가 생기면 안됨
- 실험기구는 멸균된 것을 사용
- autoclave tape에 검정색 줄이 생기면 멸균처리 된 것
- 만들어진 배지는 7일 내에 사용
- 보관할 때 약 37℃가 적당
4. Result
배지가 적당히 굳어 잘 만들어졌다. 1.5g LB plate가 3g LB plate보다 조금 더 투명도가 높았고, 3g LB plate가 1.5g LB plate보다 조금 더 단단했다. 육안으로 관찰했을 때 큰 차이는 없었다.
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