보고서 설명

1. 도구 및 방법

가) 실험 도구
1) Protein reagent (Bradford reagent)
* 50 ml의 95% 에틸알코올에 100 mg의 Coomassie Brillant Blue G-250을 녹인다.
* 여기에 85% phosphoric acid 100 ml을 넣고 잘 섞는다.
* 증류수를 넣어서 총량이 200 ml이 되게 한다 (이 농축 염색약은 4 ℃에서 약 6개월 동안 보관 가능). 실제 시료에 넣는 염색약은 중류수 4 volume을 넣은 희석 염색약을 사용한다.
2) Protein Standard
* BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다.
3) Spectrophotometer와 Quartz cuvettes.
4) Milk.

본문일부 및 목차

나) 실험 방법

1) protein양을 정확히 알지 못하는 milk를 희석한다 (총 20ul가 되게 함)
1/2: DW 10ul + milk 10ul
1/5: DW 12ul + milk 8ul
1/10: DW 10ul + 1/5 10ul
1/50: DW 16ul + 1/10 4ul
2)

Bradford solution + BSA(1mg/ml) 0, 2, 4, 8, 12ul = 200ul이 되게 ep tube에 만든다
(각 sample 2개씩 만든다)


Bradford solution 198ul + diluted sample 2ul = 200ul
(각 sample 2개씩 만든다)
3) 각 standard sample을 96well plate에 넣는다. (bubble이 생기지 않게 조심)
각 희석된 unknown samples을 96well plate에 넣는다. (bubble이 생기지 않게 조심)

4) ELISA를 통해 standard의 평균 흡광도를 구하고 standard curve (x축: protein양, y축: 평균 흡광도)를 그린다.

5) ‘standard curve와 ’희석된 unknown samples의 평균 흡광도‘ 를 이용해서 ’희석된 unknown samples‘의 protein 농도를 구한다 (나온 값의 1/2를 해라)

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