보고서 설명

생화학실험 RNA Polymerase 분리 정제에 관한 레포트입니다.
생화학실험하시는분들 참고하시길 바랍니다.
생화학실험 RNA Polymerase 분리 정제에 관한 레포트입니다.
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본문일부 및 목차

1. Cell lysis

① pellet을 녹인 후 Buffer LB 26ml 분주하여 섞는다.
② 잘 섞은 pellet을 ice에 박혀있는 비커에 붓고 stirring하여 6ml lysozyme에 분주한 다음, 66ml PMSF와 33ul leupeptin도 첨가한다. (20min 반응시간 준다.)
③ 20min 후, 3ml 0.8% Sodium deoxycloate 첨가하고 20min 반응 시간 준다.
④ 20min 후, 50ul PMSF 첨가하고 5.6ml 2M Ammonium Sulfate 첨가한다.
⑤ Total volume 56ml 까지 Buffer LB를 첨가한다.
⑥ 5.6ml 10% PEI를 아주 천천히 넣어주고 20 min 반응시간 준다.
⑦ 39.00g 4도에서 15min ultra centrifuge한다.
⑧ supernatant만 비커에 담고 전체 volume의 0.82배(46ml) ammonium sulfate를 천천히 첨가시켜 15

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