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액체크로마토그래피-HPLC에의한카페인분석 ABSTRACT & INTRO...

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액체크로마토그래피-HPLC에의한카페인분석 ABSTRACT & INTRODUCTION 실험 목적 및 의의 실험 1 에서는 흡광 분석을 통해 혼합 용액 속 색소의 혼합비율을 구한다. 실험 2에서는 혼합물을 분리하는 방법 중 하나인 역상크로마토그래피를 사용하여 색소를 분리하고 분리한 색소들을 흡광 분석하여 위의 결과와 비교한다. 이 두 실험을 통해 분광 광도계와 역상크로마토그래피의 사용법을 익히고, Beer-Lambert 법칙에 대해 이해하도록 한다. 실험 원리ƒ) Beer-Lambert`s law A=εbC A는 흡광도로, T를 투광도라 하면 A=log로 정의된다. b는 빛을 흡수하는 시료를 담은 용기의 두께이며 단위는 ㎝이다. C는 시료의 몰농도이고 ε는 상수로, 몰 흡수계수라 한다. “흡수된 빛의 분율은 통과되는 물질 층의 두께에 비례한다.”는 Lambert`s law와 “흡수된 빛의 분율은 통과되는 물질의 농도에 비례한다.” Beer`s law를 합친 법칙이다.„) 크로마토그래피 두 가지 이상의 성분으로 된 물질을 각 단일성분으로 분리하는 기법. 분리하고자 하는 물질의 각 성분은 두 종류의 상, 즉 고정상과 이동상으로 다르게 분포하는데, 이 분포의 차이에 근거하여 분리가 이루어진다. 이런 차이는 흡착 능, 분배계수, 휘발성, 이온교환 능의 차 등이 있다. ① 정상 크로마토그래피 (Normal phase chromatography)극성이 높은 silica gel, alumina, 종이 등을 고정상으로 극성이 낮은 유기용매를 이동상으로 이용 ② 역상 크로마토그래피 (Reversed phase chromatography)고정상으로 극성이 낮은 탄화수소(C-18 또는 C-8, Carbon Chain이 18개 또는 8개 있어 대단히 hydrophobic 함)를 이동상으로 극성이 높은 물이나 에탄올, 아세트 니트릴, tetrahydrofuran (THF)을 사용함. 시료 중 극성이 작을수록(수용성이 작을수록) 느리게 용출됨....

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