보고서 설명

DNA의 추출 및 전기영동에 관한 실험 보고서

본문일부 및 목차

DNA의 추출 및 전기영동

1. 플라스미드의 추출

재료

LB medium(적당한 항생물질이 첨가된), Glucose/Tris/EDTA(GTE) solution, TE buffer, NaOH/SDS solution, Potassium acetate solution,(pH 4.8 ), 95% ,70% 에탄올

실험방법

1) 멸균된 LB배지 5ml에 단일 박테리아 콜로니를 접종시킨 후, 37C에서 배양시킵니다.

2) 1.5mL tube에 배양액을 가득 붓고 20초간 원심분리 시킨 후, 배양액을 따라버리고 침전물에 100uL의 GTE 용액을 넣고 5분간 상온에 둡니다.

3) 200uL의 NaOH/SDS 용액을 넣고 섞어준 다음 5분간 얼음 속에 보관합니다.
150 m L의 potassium acetate 용액을 넣고 2초간 볼텍스(vortex)한 후, 5분간 얼음 속에 보관합니다.

4) 3분간 원심분리 시킨 다음 0.4mL정도의 상층액을 새로운 튜브에 넣습니다. 95% 에탄올을 0.8ml넣고, 2분간 상온에 둡니다.

5) 상온에서 3분간 원심분리 시킨 후 70% 에탄올 1mL로 침전물을 세척한 다음 진공에서 말립니다.

6) 침전물에 TE buffer를 30m L 넣습니다.


2. 전기영동


원리; 특별한 매질(아가로즈; 아가와 같이 용액을 굳히는 역할을 하며 아가보다 그 순도가 더 높습니다, 아크릴아마이드)을 이용하여 고분자 물질(DNA나 단백질)을 분리하는 방법이예요. 아가로즈(agarose)에 DNA를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 음전하를 띠므로 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 됩니다. 이해되시죠? 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기, 모양에 따라 다르므로 매질내에서 종류에 따라 분리되게 되요. 전기영동은 DNA의 크기, 분리, 양의 확인 등 모든 DNA조작과 매 단계에 있어 꼭 필요한 방법이지요. 전기영동을 하기 위하여 DNA용액을 아가로즈에 넣어 주려면 DNA용액을 넣기 위한 장소(well)가 필요해요. 아가로즈를 굳힐 때 빗 모양으로 생긴 comb을 꽂아, 굳으면 빼서 움푹 파인 홈을, DNA를 넣어 전기영동시키는 장소로써 사용하지요.


기구 ; 전기영동장치, 전원공급장치, 50 x TAE 용액, 팁(tip), 마이크로피펫(micropippet), 5mL 튜브


재료 ; loading 염색약, DNA 용액(프라미드 DNA, 식물 DNA, 제한효소로 자른 후 DNA용액), 메틸렌블루, 리가아제, 아가로즈
DNA loading 염색약의 역할은 무엇일까요?
아가로즈의 well에 DNA를 넣어줄때 DNA용액을 무겁게 하여 아가로즈의 홈으로 가라앉하는 역할을 하며 그 성분에 전기영동되는 속도가 다른 두개의 염색시약이 들어 있어 DNA와 같이 전기영동되며 DNA의 전기영동된 정도를 알 수 있게 하는 역할을 합니다.

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