보고서 설명

Mini Prep이란 DNA-isolation에 있는 원리 중 하나로 Plasmid DNA분리에 사용되는 방법이며 많은 후보를 빠른 시간 내에 분석하는 방법이다. Prep은 Prepartion의 약자.DNA를 소량으로 추출한다는 의미. 주로 이용되는 Alkylation lysis(denaturation)법과 boiling method, Iithium method법이 있다.

본문일부 및 목차

DNA와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix의 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 PH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다.

3.실험방법

3ml bacterial culture (DH5a T-vector OmPGRP)를 12000rpm에서 1분간 centrifuge (2ml e-tube에 1.6ml씩 여러 번 나누어 cell down 시킨다.)

※OmPGRP는 염기쌍이 600개인 유전자. 대장균에 넣고 빼내는 실험 centrifuge: 원심분리. 각 tube에 자신의 이름을 써놓는다.


상층액을 버리고, 250㎕의 S1 buffer (Resuspension buffer)를 넣어 pellet을 resuspend.
(덩어리가 남지 않도록 vortexing이나 pipetting으로 충분히 resuspend.)

※Solution I은 EDTA를 첨가하여 cell wall의 Mg2+를 chelating 함으로써 cell wall을 깨지기 쉬운 상태로 만들어 주되 cell이 깨지지 않게 하기 위해 glucose로 삼투압을 유지시켜 준다. 그러므로 cell이 용액에 고루고루 영향을 받을 수 있도록 완전히 풀어준다.

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#미생물학 실험

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